总结
本发明涉及一种基于PCR技术克隆已知区域旁邻的未知DNA序列的引物及方法。引物包括5’端接头区域、中间简并区域和3’端锚定碱基三个组成部分，其中根据物种碱基的偏好性的不同，针对三种碱基群体分布，设计引物的简并区域。引物的设计结合优化后的PCR扩增反应，特异性强，适应性广，能有效地扩增出已知区域旁邻的未知DNA序列。其操作简便，仅需一轮交错热不对称PCR反应，大大节省了商业成本，增加了扩增效率。本发明采用同源重组的形式克隆PCR扩增产物，使非特异性产物在进行同源重组时可以成功的规避掉。同时，在扩增的目标片段为多条或不清晰时，也依然可以进行同源重组反应，获得完整清晰的目标序列。因此，显著减少了实验投入，提高实验效率。
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