总结
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种用于大片段DNA无缝组装的系统及组装方法，所述组装方法包括：S1、构建载体系统；S2、目标片段克隆：将大片段DNA分成多个目标片段，并将目标片段按顺序交替克隆到供给载体D1、D2上；S3、连续组装：用EN1同时酶切接受载体A和酶切供给载体D1‑seg1，通过组装反应得到pBWRA‑seg1，然后采用EN2酶切pBWRA‑seg1和供给载体D2‑seg2，通过组装反应得到pBWRA‑seg1‑seg2；S4、重复步骤S3，根据确定的组装顺序将目标片段分步组装连接到接受载体A上，形成最终所需要的载体。本发明通过人工设计的RNA介导的LbCas12a核酸内切酶能够支持更大片段的连接，在含有多个基因的转基因载体构建、合成生物学、代谢通路研究等方面具有良好的应用前景。
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