本发明提供一种通过腐胺和固液交替培养提高棉花胚状体发生效率的方法，包括以下步骤：(1)选取棉花种子，去除种皮；(2)无菌苗培养；(3)愈伤组织诱导和胚性愈伤组织诱导；(4)胚性愈伤组织的增殖；(5)基于外源腐胺固液交替培养的胚状体分化调控；(6)生根培养；(7)驯化与移栽。本发明方法中提供的MSB培养基为改良的MSB培养基，由MS无机盐和B5有机物构成，在固液交替培养过程中促进胚状体分化时添加了1mM腐胺可以显著提高胚状体分化。本发明为提高棉花体细胞胚胎发生效率提供了一种有效的方法，具有一定的社会效益和经济效益，对我国棉花产业发展有重大贡献。